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 第七章 体内药物分析法 |
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考试要求：
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药物的体内过程： 治疗药物监测：以灵敏可靠的方法，检测病人在给药后的血液或其他体液中的药物浓度，并应用药物代谢动力学理论，指导最适个体化用药方案的制定和调整，以避免用药剂量过大及可能产生的毒性反应，保证药物治疗的有效性和安全性。 |
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体内样品的采集时间
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一、血样 |
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血清、血浆的区别 加入抗凝剂后，全血离心制的血浆。不加抗凝剂，自然沉降后离心制的血清。 采血后应尽快（一般不超过2h ）分离出血浆、血清，再冰冻保存（-20℃）。 |
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二、尿液 用于药物剂量回收、药物肾清除率及生物利用度的研究，以及药物代谢物及其代谢途径、类型和速率等的研究。 PH：4.8-8.0 1、尿液的分类  |
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2、尿液的采集 测定尿液中药物浓度——自然排尿、时间尿 测定尿液中药物总量——自然排尿、各时间段全部尿液 3、尿液的处理方法 保存：低温保存，或加入防腐剂。 处理：酸、酶水解 |
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三、唾液 PH：6.2-7.6 1、唾液的采集 漱口后15min。 2、唾液的处理方法 保存：冷藏 处理：去除泡沫，离心取上清液，加碱处理（分离黏蛋白） |
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一、体内样品处理的目的  二、体内样品处理的常用方法  |
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1、去除蛋白质法 去除蛋白质的意义——使结合型药物释放出来，得到较“干净”的提取液，消除对测定的干扰 去除蛋白质的方法： 蛋白质沉淀法 加与水混溶的有机溶剂脱水 加入强酸生成不溶性盐 加无机盐盐析 蛋白分解法——蛋白水解酶（枯草菌溶素） |
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2、缀合物水解法 缀合物水解的意义——药物经二相代谢可以形成葡糖醛酸苷或硫酸酯缀合物，为了准确测定体内样品中药物的含量，首先需将缀合物水解释放出缀合的药物或其代谢物后，再进行进一步的处理测定。 缀合物水解的方法： 酸水解（HCl）：简便、快速，但专一性差 酶水解：β-葡萄糖醛酸苷酶、硫酸酯酶、两者混合酶，专属性高 3、分离纯化与浓集法 分离、纯化、浓集的意义——提高分析的特异性和灵敏度。 常用方法： 液-液萃取——选用与水不相混溶的有机溶剂进行提取 溶剂提取的关键问题是——提取的选择性和提取率的重复性 影响提取率的因素主要有： 水相pH、提取溶剂、离子强度 离子对萃取法 固相萃取法——利用柱色谱进行分离 |
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固相萃取法 利用柱色谱分离方法，将具有吸附、分配或离子交换性质的大比表面积吸附填料作为萃取剂填成小柱，以适宜溶剂淋洗活化后，将体内样品通过小柱，微量的待测成分被保留，而内源性干扰物质则大都不被保留而通过，用淋洗溶剂进一步洗去干扰物后，再用洗脱溶剂将药物洗脱收集，挥干溶剂后，用少量溶剂复溶进行分析。  |
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4、化学衍生化法 ①衍生化目的 增加组分的稳定性 改善被测组分的色谱行为 增加被测物的检测灵敏度和选择性 提高对光学异构体分离的能力 ②衍生化方法 GC——硅烷化、酰化、烷基化 HPLC——荧胺、丹酰氯、邻苯二醛（柱前衍生化、柱后衍生化） 手性衍生化法 |
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一、常用测定方法
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二、定量分析方验证 1、特异性 内源性物质的干扰、代谢产物的干扰、同用药物的干扰 要求：6个不同来源的空白体内样品色谱图、空白体内样品外加标准物质色谱图（注明浓度）及用药后的体内样品色谱图。 （体外分析的专属性） 2、标准曲线与线性范围 要求：用至少6个浓度建立标准曲线，应使用与待测样品相同的生物介质，线性范围要能覆盖全部待测浓度，不允许将线性范围外推求算未知样品的浓度。随行空白体内样品，但标准曲线不包括零点。（体外分析要求至少5个浓度） |
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3、定量下限 标准曲线上的最低浓度点。S/N应大于5。实际测定时，满足3～5个半衰期浓度，或Cmax1/10～1/20。至少5个标准样品测试结果证明。 （体外分析要求S/N=10） 4、精密度与准确度 样品选择：选择3个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。低浓度选择在定量下限3倍以内，高浓度接近于标准曲线的上限附近；中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定5个样品。 精密度：批内精密度、批间精密度（不同天连续制备3个分析批）。用RSD表示，要求小于15%，在最低定量限附近小于20%。 准确度：准确度用相对回收率表示。一般应在85%～115%范围内，在最低定量限附近应在80%～120%范围内。（体外分析要求95-105%） |
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5、样品稳定性 表示一种分析物在确定条件下，一定时间内在给定介质中的化学稳定性。 要求：根据具体情况，对含药生物样品（或储备液、样品处理液）在室温、冰冻或冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察。 6、提取回收率 分析过程的提取效率，能反映出样品预处理过程中组分丢失的情况，是评价萃取方案优劣的指标之一。以样品提取和处理过程前后分析物含量百分比表示。 要求：考察高、中、低3个浓度的提取回收率，其值一般低于100%（可能低至60%），但重要的是重现性好。 |
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7、质控样品 在生物介质中加入已知量待测药物所配制的样品，用于质量控制。 8、质量控制 应在生物样品分析方法确证完成之后开始测试未知样品，每个未知样品一般测定一次，必要时可进行复测。 每批生物样品测定时应建立新的标准曲线，并平行测定高、中、低3个浓度的质控样品。 质控样品测定结果的偏差一般应小于15%。 9、测试结果 |
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三、应用 治疗药物监测——易中毒的药物 药代动力学研究 盐酸吗啡、磷酸可待因、硫酸庆大霉素体内、阿奇霉素 历年考点 体内样品的处理方法 |
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